Vad är Gelelektrofores?

May 2

I gelelektrofores, är en elektrisk ström appliceras på en gelmatris som innehåller prover av DNA, RNA eller protein. Den elektriska strömmen bringar proteinet eller nukleinsyramolekyler att röra sig genom gelén, vilket möjliggör separation av molekyler av olika storlekar. Denna teknik används för att detektera eller isolera molekyler av en viss storlek från en blandning av nukleinsyror eller protein.

Det första steget i gelelektrofores protokollet är att placera ett block av gel i en liten tank. Gelén är tillverkad av en förening som bildar ett fast ämne vid rumstemperatur och har en neutral laddning. Tanken som håller gelén blocket fylls därefter med tillräckligt mycket av en speciell gelelektrofores buffertlösning för att fullständigt täcka gelen.

I ena änden av gelén blocket är en serie av små brunnar. En liten mängd av en DNA eller proteinprov tillsätts till varje brunn. Varje enstaka brunn innehåller ett försöksprov med en okänd blandning av nukleinsyra eller protein. En ytterligare brunn innehåller ett kontrollprov med en blandning av nukleinsyra eller protein av kända storlekar. Varje prov, inklusive kontrollen, har blandats med ett färgämne för att hjälpa till att identifiera var de olika proverna en gång elektroforesen är klar.

När allt detta set-up arbete är slutfört, är elektrofores initieras genom att en elektrisk ström till uppsamlingstanken där gelén är belägen. Den elektriska strömmen driver provmolekylerna genom gelén, vid en hastighet som är proportionell mot storleken av molekylen. Mindre molekyler färdas genom gelen snabbt, medan större reser långsamt. Genom att molekylerna färdas, separera de ut på gelén beroende på deras storlek.

När det färgade färgämnet når den andra änden av gelén, är den elektriska strömmen avlägsnas, och gelén färgades med en lösning som förbättrar färgen hos färgämnet. Slutligen gelen "läsa" genom att mäta hur långt varje molekyl har rest under den tillåtna tiden för elektrofores. Denna information kan användas för att beräkna storleken på varje molekyl i varje prov.

Det finns flera olika typer av experimentella tekniker som använder elektrofores. I en Southern blöt, är agarosgelelektrofores användes för att isolera fragment av DNA eller RNA. Den västra blot använder polyakrylamidgelelektrofores att isolera proteiner från en blandning. Var och en av dessa tekniker används för att leta efter en viss fördefinierad sekvens av nukleinsyra eller protein. Elektrofores och blotting-tekniker används inom många områden av biologisk forskning, såväl som i medicinska och kriminaltekniska vetenskaperna.

  • I gelelektrofores, är en elektrisk ström appliceras på en gelmatris som innehåller prover av poster såsom DNA.