Vad är Polyakrylamidgel?

May 14

Polyakrylamidgel är en lösning som vanligen används vid elektrofores, processen för att separera ut olika stora molekyler eller partiklar genom att passera dem genom en gel och tillföra elektrisk ström. Det finns olika recept på polyakrylamidgel, men det innehåller typiskt akrylamid, vatten, en buffert, ammoniumpersulfat (APS) och tetrametyletylendiamin (TEMED). Denna gel fungerar som en matris som separerar ut föreningar baserat på deras laddning och storlek; desto mer akrylamid i gellösningen, desto bättre separation av mindre molekyler. Typiskt denna gel används för protein och DNA-separation.

I elektrofores, ett elektriskt fält orsakar laddade partiklar att röra sig genom en gel, som fungerar som en sil för att bringa de olika stora partiklarna att separera. Gelen kommer att absorbera den värme som producerats från den elektriska strömmen. Polyakrylamidgel används ofta i dessa förfarande, men agaros, en annan kemikalie som skapar en liknande gel, kan också användas.

Geler kan tillverkas av varierande koncentration, med den mängd akrylamid sträcker sig från omkring 6% till 15%. Vid blandning upp gelen är akrylamid opolymeriserad, vilket betyder att det förblir som enskilda molekyler. Tillsats av andra kemikalier som främjar bindande, såsom TEMED, bringar molekylerna att länka tillsammans bildar långa kedjor - en "poly" delen av polyakrylamid.

Den största fördelen med polyakrylamidgel är att antalet länk obligationer och hårdhet kan styras baserat på den ursprungliga mängden akrylamid och TEMED lagt. En huvudfaktor i koncentration akrylamid är storleken av molekylen som analyseras. Ju mindre föreningarna separeras, behövs mer akrylamid; mycket små partiklar separeras med hjälp av högsta koncentrationen, 15 procent.

Akrylamid fungerar genom styrning av mängden friktion i gelén; hårdheten hos gelén bestämmer mängden friktion. Föreningar som är stora kommer att flytta genom gelen långsammare eftersom det finns naturligtvis mer friktion eller motstånd på grund av sin storlek. Mindre föreningar gå snabbare, eftersom det finns mindre friktion. För att förhindra att små föreningar från att flytta bort gelen är mer akrylamid sätts för att skapa mer friktion.

DNA-polyakrylamidgel används för att separera DNA-strängar av olika längd. Bitar av DNA kommer att separera med så lite som en nukleotid, är föreningarna som utgör varje sträng. För att veta vilka delar hänvisar till de specifika storlekar är en standard som innehåller fragment av en känd storlek vanligtvis kör tillsammans med prover. De DNA-bitar jämförs sedan med standarden, och storleken på strängen bestämmes.

En liknande procedur används för att bestämma storleken av proteiner, oftast de som i blod. Blod innehåller två huvudtyper av protein: globulin, en stor storlek protein, och serumalbumin, en mycket liten, negativt laddad protein. Separation med hjälp polyakrylamidgel används för att bestämma mängden av varje typ.

  • Olika längder av DNA-strängar kan separeras med polyakrylamidgel.