Vilka är de olika metoder för protein Koncentration Fastställande?

October 28

Det finns hundratals olika metoder proteinkoncentrationsbestämning av. Den otroliga mångfalden i de typer av proteinlösningar som biokemister analysera varför det inte finns någon enda universalmetod som fungerar för alla typer av proteinlösning. De vanligaste proteinanalyser är Bradford-analysen, Lowry-analysen och den bicinkoninsyra analysen. Ändå har otaliga varianter utvecklats som behövs för att komma runt eventuella kemisk inkompatibilitet mellan proteinlösningen och reagenser som används i analysen.

Generellt sett finns det två huvudkategorier av analyser för proteinkoncentrationsbestämning. I den första gruppen av metoder, är en färgstark eller fluorescerande färgämne sattes till en proteinlösning, och det binder specifikt till proteinet. Det bundna färgämnet har en unik absorption våglängd som är proportionell mot mängden protein. Genom att använda en spektrometer, blir det möjligt att uppskatta koncentrationen av protein.

Den andra gruppen av analyser innefattar tillsats av koppar (II) joner till en lösning av protein, där dessa joner reduceras till koppar (I) joner. Dessa reducerade joner kan då bilda färgglada komplex genom att binda till proteiner. Genom att mäta absorbanserna vid deras unika våglängder, kan de proteinkoncentrationer likaledes härledas.

En av de mest populära metoderna proteinkoncentrationsbestämning av den Bradford-analysen. I denna analys kallas ett rött färgämne Coomassie Brilliant Blue sätts till en proteinlösning under sura betingelser. Eftersom detta färgämne binder till protein, det bildar en permanent blå komplex med en karakteristisk absorbans vid 595 nanometer.

Trots den allmänna mångsidighet av Bradford-analysen, är det oförenligt med vissa proteinlösningar. I synnerhet är Bradford-analysen störs av närvaron av natriumdodecylsulfat (SDS), en detergent som ofta används för att rena proteiner och bryta ned cellerna genom lys. Detta diskmedel stör bindning av färgämnet till proteiner, vilket resulterar i en opålitlig och felaktig absorption läsning. Andra typer av metoder måste då användas när SDS är närvarande.

En annan serie av proteinanalyser har utvecklats, och de innebär en variant av Biuretprovet. I denna reaktion, är ett protein i kombination med en vattenhaltig bas och koppar (II) joner. Dessa Joner reduceras och sedan kelaterad av protein för att bilda färgglada komplex. Två analyser som använder detta test är Lowry analysen och bicinkoninsyra analysen.

Med Lowry-analysen är ett Folin-Ciocalteureagens läggs till Biuretprovet. Folin-Ciocalteureagens oxiderar aromatiska rester, särskilt tryptofan, och hjälper den komplexa absorberar starkt vid 750 nanometer. Den bicinkoninsyra-analysen, å andra sidan, innefattar tillsats bicinkoninsyra till Biuretprovet. Efter en kort inkubation vid ca 104 ° Fahrenheit (40 grader Celsius), två ekvivalenter av syra och peptidbindningarna i proteinet kelat en enda koppar (I) jon. Resultatet är ett komplex som absorberar starkt vid 562 nanometer.

Vid val av en metod för proteinkoncentrationsbestämning, är det viktigt för en att beakta de olika kemiska funktionella grupper närvarande i lösningen. Förekomsten av vissa aminosyrasidokedjor, disulfidbindningar och kofaktorer kan göra proteinkoncentration bestämn det befängt felaktigt. Det är ofta nödvändigt för en att ta hänsyn inte bara proteinerna, utan även andra reagens och buffertar, såsom reduktionsmedel och detergenter. Den ideala metoden blir kemiskt kompatibla samt vara tillförlitlig, billig och enkel att installera.

  • I en metod proteinkoncentrationsbestämning, ett färgat färgämne som binder till proteinet av sätts till en proteinlösning.